Хромогенное исследование по конечной точке (или метод Е) – фотометрический инструментальный метод ЛАЛ-теста. Состоит из двух этапов – инкубирования и оценки результатов. Благодаря составу ЛАЛ-реактива испытуемая смесь приобретает разную степень желтизны за счет выделения пара-нитроанилин (ПНА) при реакции с эндотоксином. Интенсивность окраса обусловлена концентрацией эндотоксинов в образце.
Подопытный состав в определенной пропорции смешивают с ЛАЛ-реактивом. Смесь готовят в специальном планшете (на 96 лунок), затем его помещают на инкубацию в термостат, задавая температуру 370С на определенный период времени (указывается в сертификате анализа производителя).
При тестировании методом по конечной точке по истечении точно заданного времени инкубации необходимо удалить микропланшет или пробирки из инкубационного блока, остановить реакцию путем добавления 50% уксусной кислоты (в объеме достаточном для получения конечной концентрации 10% уксусной кислоты, используйте 0,025 мл для объемов образца/реактива 0,05 мл) и определить оптическую плотность (ОП) в спектрофотометре или микропланшетном ридере при длине волны 405 нм. Тестирование должно проводиться таким образом, чтобы инкубационный период для каждого образца был одинаковым (в пределах ± 30 секунд). Инкубационный период зависит от диапазона стандартных концентраций эндотоксина, а также будет меняться в зависимости от серии реактива Pyrochrome® и КСЭ. Предварительные тесты могут быть необходимы для определения правильного инкубационного периода.
Степень концентрации эндотоксинов рассчитывается по калибровочной кривой стандартного типа.
Поскольку в состав реактива для данного метода входит хромогенный субстрат искусственного происхождения, результаты исследования подвергаются ингибированию от тестируемых препаратов в меньшей степени по сравнению с гель-тромб или КТ-методами. К преимуществам инструментального метода ЛАЛ-теста также относят широкий диапазон измеряемых концентраций и автоматизацию процедуры – с помощью специальных программ анализ и обработка результатов происходят более точно и контролируемо.
Компания «ЛАЛ-Консалтинг лтд» поставляет все необходимое для ЛАЛ-тестов от ведущих мировых производителей Associates of Cape Cod, Merck, Sartorius, Eppendorf. Мы консультируем и обучаем методикам проведения ЛАЛ-тестов.